项目名称: THERAPEUSKIN
课题: STREP (特殊目标研究计划Specific targeted research project)
欧盟资助：150万欧元
欧洲DebRA资助：3万欧元
目标：开发RDEB的体外基因疗法

原文链接因改版失效。翻译：周迎春。初次翻译：2006年8月。最后更新:2012/12/30 。

第一步

  • 设计安全的SIN（自灭活）逆转录病毒和和慢病毒COL7A1载体
  • 测试不同的启动子和病毒被膜蛋白的基因传递性能和在培养的原始角化细胞和纤维原细胞中的表达
  • 研究被传导细胞的增生能力，评估重组后VII型胶原的长期表现，分析基因中前病毒成分的副作用
  • 分析重组VII型胶原的合成、折叠和分泌，及它在类皮肤环境和老鼠移植皮肤中组成锚原纤维的能力。
  • 按照GLP（良好实验室规范）标准构建和生产基因携带体。

第二步

  • 通过细胞克隆产生高浓度的已选定自灭活逆转录病毒，或扩展、筛选并建立慢病毒载体的主细胞库
  • 测试主细胞库的安全性，制备临床级的病毒粒子

第三步

  • 选择6名患者（3名有COL7蛋白，另3名没有）进行I/II期临床试验。把基因修复过的自体细胞移植到一小块皮肤上。
  • 始终遵从安全、伦理和法律要求。
  • 完成RDEB基因治疗的原理证明，确立基因疾病的体外基因治疗模型

合作组织

  • INSERM U563, Department of functional genetics of epithelial diseases (France) Project Co-ordinator
  • School of Life Sciences, Swiss Federal Institute of Technology (Switzerland)
  • Department of Dermatology, Necker Hospital (France)
  • Généthon (France)
  • Centre for Cutaneous Research (UK)
  • St John’s Institute of Dermatology (UK)
  • Max-Planck-Institute fur Biochemie (Germany)
  • DEBRA Europe (UK based)
  • INSERM Transfert (France)

Alain Hovnanian的皮肤治疗报告

2005年11月16日

    2005年7月在巴黎召开了第一次项目启动会议。第二次会议计划于2006年1月召开。

    现在已经取得了重要的成果。Zanta-Boussif医生和Genethon的Olivier Danos已经设计出了安全的逆转录酶病毒载体，可以把COL7A1的互补基因（cNDA）转运到角化细胞和纤维原细胞中。这个载体是自灭活 的，COL7A1的表达受启动子控制。Alain Hovnanian组内的Matthias Titeux已经对这个新的载体做了大量测试，证明它在培养液中把RDEB矫正基因转运到角化细胞和纤维原细胞中的效率很高。用基因矫正过的角化细胞和纤维原细胞重新生成了皮肤组织，并且已经移植到免疫抑止的老鼠身上，用于研究VII型胶原的长期效果。VII型胶原已经从新的细胞中分泌出来，并且沉积到了 基底膜上。电镜检查发现形成了锚原纤维。

    同时，临床医生已经确定了可以进行首次临床试验的RDEB患者。

    瑞士的Yann Barrandon医生的小组在临床试验的法律许可方面已经取得了显著进展。通过EurosStemCell组织，这个小组还参与了移植技术的改进。安全 的COL7A1逆转录酶病毒载体已经送到了Yann Barrandon医生的小组，以进行实验室的基因转移。

    Dart医生和Irene Leigh医生已经与英国讨论了泛欧基因治疗的医学法律问题。 COL7A1逆转录酶病毒载体也送到Leigh医生的实验室研究（不太可能有）癌症反应。

    Moroder医生的小组和Hovannian医生的小组同时在研究重组生成的VII型胶原的生物化学特性。

    总之，用安全的COL7A1逆转录酶病毒载体进行体外基因治疗的前临床研究已经取得了重大进展。可行性已经得到证明。现在关注的焦点是新生成的VII型胶原的免疫耐受力，开发另一种安全的COL7A1慢病毒载体，观察有无肿瘤形成，和最终进行首次临床试验。

 

    cDNA：染色体DNA链上有许多段不表达的碱基序列，称为内含子。当这些DNA编码蛋白时， 会在体内酶的作用下剪切掉这些内含子，并转录成mRNA，再由mRNA翻译成蛋白质。因此，蛋白质的结构不是和DNA序列完全对应的。由于RNA与蛋白质 结构完全对应，给科研人员提供了解决问题的方法，即先提取mRNA，通过逆转录技术把它制成DNA，这种DNA与染色体DNA的主要差别在于它没有内含 子，是连续可表达的。为了便于区别，人们称它为cDNA（complementaryDNA）。